原癌基因c-met mRNA实时荧光定量PCR参考标准的构建

• 作者: 吕建新 岑东 裴仁治
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 原癌基因c-met mRNA 实时荧光定量PCR 参考标准
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 101-103
• 页数: 3页
• 分类号: R730.43
• 字数: 2918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2005.02.007

摘要

目的构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测原癌基因c-met mRNA的表达.方法以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA.以RT-PCR法制备c-met cDNA目的片段并进行扩增;以A-T载体克隆法将纯化的目的片段与pGEM-T Easy Vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α.采用碱裂解法提取重组质粒,联合用直接PCR、α互补法和氨苄青霉素筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并测定A260,从而确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备FQ-PCR梯度浓度标准.结果 c-met cDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性.结论成功构建了c-met实时FQ-PCR参考标准.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新	温州医学院检验医学与公共卫生学院	153	1535	21.0	32.0
2	裴仁治	鄞州人民医院检验科	5	10	2.0	3.0
3	岑东	鄞州人民医院检验科	3	6	2.0	2.0