热休克蛋白90β(HSP90β)真核表达载体的构建及体外表达

• 作者: 刘涛 梁传余 田聆 赵菊梅 魏于全
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤/遗传学 热休克蛋白90β(HSP90β) 真核表达载体 质粒pcDNA3.1(+)
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 305-310
• 页数: 6页
• 分类号: R739.63|Q51
• 字数: 4752字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1520.2005.05.005

摘要

目的克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β,并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础.方法提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA.用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β.将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β.经酶切和测序后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达.结果酶切及测序鉴定表明,hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)/hHSP90β.该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子.结论采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1(+)中;pcDNA3.1(+)/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁传余	四川大学华西医院耳鼻咽喉科	287	1719	19.0	26.0
2	刘涛	四川大学华西医院耳鼻咽喉科	82	496	12.0	19.0