大鼠热休克蛋白47真核表达载体的体外构建

• 作者: 王佐林 程杰
• 来源期刊: 口腔颌面外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白47 基因克隆 基因转染 质粒
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R782|Q782
• 字数: 2866字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4979.2007.01.002

摘要

目的:体外构建大鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)的荧光真核表达载体,并检测其在鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3中的表达.方法:应用RT-PCR方法从大鼠肝脏中分离、扩增目的片断,双酶切定向克隆到真核表达载体pTracer-CMV中,构成重组质粒pTracer-CMV-HSP47,测序验证.通过脂质体介导质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,Western b1otting和免疫细胞化学检测HSP47及Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的表达变化.结果:通过RT-PCR获得1.3kb的cDNA片断,测序发现除个别碱基差异外,其余cDNA序列与基因库(Genebank)中序列一致,且编码的氨基酸序列完全一致.转染后经Western blotting和免疫细胞化学检测证实HSP47和collagen Ⅰ表达明显增强.结论:本研究成功构建了大鼠HSP47荧光真核表达载体pTracer-CMV-HSP47,并能在NIH/3T3细胞中表达,同时证实HSP47能促进collagen Ⅰ的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王佐林	同济大学附属口腔医院口腔颌面外科	51	295	11.0	14.0
2	程杰	同济大学附属口腔医院口腔颌面外科	7	12	2.0	2.0