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摘要:
目的:体外构建携带大鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的荧光真核表达载体,并观察其在人胚肾293T(human embryo kidney 293T,HEK293T)细胞中的表达.方法:从SD大鼠骨组织标本提取RNA,应用逆转录PCR(reversal transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)方法扩增目的片断,双酶切克隆到增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent proteins,EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,构成重组质粒pEGFP-OPN,经酶切鉴定和测序验证.通过脂质体介导重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,并用RT-PCR检测OPN的表达.结果:成功构建重组质粒pEGFP-OPN,测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_012881)同源性为100%.将其转染HEK293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达,并通过RT-PCR检测到OPN的表达.结论:本实验成功构建了大鼠OPN荧光真核表达载体pEGFP-OPN,并能成功地在HEK293T细胞中表达,为OPN的进一步研究奠定了一定的实验基础.
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关键词云
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文献信息
篇名 大鼠OPN真核表达载体的构建和体外表达
来源期刊 口腔颌面外科杂志 学科 生物学
关键词 骨桥蛋白 真核表达载体 基因克隆 基因转染 重组质粒
年,卷(期) 2010,(1) 所属期刊栏目 基础研究
研究方向 页码范围 4-9
页数 6页 分类号 Q813
字数 4393字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1005-4979.2010.01.002
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王佐林 同济大学附属口腔医院口腔颌面外科 51 295 11.0 14.0
2 苏菊 同济大学附属口腔医院口腔颌面外科 2 14 2.0 2.0
传播情况
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研究主题发展历程
节点文献
骨桥蛋白
真核表达载体
基因克隆
基因转染
重组质粒
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
口腔颌面外科杂志
双月刊
1005-4979
31-1671/R
大16开
上海市延长中路399号
4-532
1991
chi
出版文献量(篇)
2824
总下载数(次)
7
总被引数(次)
15946
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