CTLA4Ig和OX40Ig的表达及其生物学活性研究

• 作者: 李爱玲 杨阳 王光明 谢蜀生 郝洁 高翔
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA) CD28/B7 OX40/OX40L 基因表达 核糖体进入位点(IRES)
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 383-387
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.05.011

摘要

目的构建p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig真核表达载体,共同表达CTLA4Ig和OX40Ig,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物扩增OX40胞外区的cDNA,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并使之在体外进行表达,用RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot鉴定目的基因的表达,ELISA法测定目的基因的表达水平和混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应. 结果测序证实所扩增的PCR产物是OX40胞外区的cDNA,其序列与GenBank中的相一致;成功构建了p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig真核表达载体;RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot结果显示,表达的蛋白为CTLA4Ig和OX40Ig,ELISA结果提示,该两种蛋白均得到了高效表达,混合淋巴细胞反应结果证实转染了p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig的CHO细胞培养上清可以有效地抑制异基因淋巴细胞的刺激作用,其抑制效果强于转染p3.1/CTLA4Ig和p3.1/OX40Ig的CHO细胞培养上清. 结论成功构建了含CTLA4Ig和OX40Ig的真核表达载体,并在体外能够同时得到表达;体外实验证实该两种分子协同作用可以有效抑制免疫应答,并且优于该两种分子单独作用时的抑制效果.