人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化

• 作者: 何凤田 卞爱娜 吉清 府伟灵 戴双双 李蓉芬 陈麟凤 高会广
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B淋巴细胞刺激因子 Th表位DNA序列 免疫抑制分子
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 370-373
• 页数: 4页
• 分类号: R730.3
• 字数: 2820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2005.05.006

摘要

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子.方法经PCR方法构建msBLyS cDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性.结果 DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致.HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达.经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上.活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖.结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础.