H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及表达

• 作者: 任涛 刘仁陆 周佩娇 廖明 戴应基 曹伟胜 朱事康 李炳清 程珏益 罗卓军 郑世萍
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H5N1亚型 NS1基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 942-945
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 3313字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.12.004

摘要

利用RT-PCR扩增了2株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并将其克隆到pMD 18-T载体上,进行序列分析.结果显示,这2株禽流感病毒NS1基因核苷酸序列的同源性为70.2%,分别属于NS等位基因群A和等位基因群B.再将克隆的NS1基因插入到pET-28a质粒中构建原核表达载体,将其转化到DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞中,经双酶切鉴定及序列分析,表明获得了重组质粒pET-52NS1和pET-174NS1.经SDS-PAGE分析,重组质粒转化BL21(DE3)(pLysS)感受态细胞后,经IPTG诱导,获得了分子质量约为30 ku的NS1融合蛋白.用AIV多克隆血清做Western-blotting分析,发现来自2个等位基因群的NS1蛋白都具有较好的抗原活性.