H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘宏生 商玲玲 孙婷婷 朱俊峰 朱春玉 王宁 艾海新 郑方亮
• 来源期刊: 辽宁大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白 克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生命与环境科学
• 页码范围: 143-148
• 分类号: Q93
• 字数: 5748字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5846.2011.02.011

摘要

克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/LIPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.