H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘明 刘春国 张云 杜绍范 杨涛
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 NS1基因 原核表达 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 585-589
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 4247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.08.001

摘要

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒 pc2X-NS1.SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku.Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应.试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘明		5	57	4.0	5.0
2	杜绍范	沈阳农业大学畜牧兽医学院	31	281	11.0	16.0
3	刘春国		3	48	3.0	3.0
4	杨涛		2	38	2.0	2.0
5	张云		2	30	2.0	2.0