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摘要:
研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达.设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1.8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达载体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GSl15中,经MD/MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P.pastoris菌22株.依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4.0mU/ml,表达量占分泌蛋白总量的23.6%.
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文献信息
篇名 人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定
来源期刊 中国生物工程杂志 学科 生物学
关键词 人脑乙酰胆碱酯酶 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 酶活性鉴定
年,卷(期) 2005,(7) 所属期刊栏目 研究报告
研究方向 页码范围 54-60
页数 7页 分类号 Q81
字数 5381字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-8135.2005.07.010
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 朱平 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 29 90 5.0 7.0
2 魏东芝 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 158 1415 22.0 29.0
3 孙曼霁 军事医学科学院毒物药物研究所 66 374 8.0 17.0
4 谭建华 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 23 358 11.0 18.0
5 马兴元 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 15 20 3.0 4.0
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研究主题发展历程
节点文献
人脑乙酰胆碱酯酶
巴斯德毕赤酵母
分泌表达
酶活性鉴定
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国生物工程杂志
月刊
1671-8135
11-4816/Q
大16开
北京中关村北四环西路33号
82-13
1976
chi
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45351
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