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人CD40 ligand基因真核表达质粒的构建及对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用
人CD40 ligand基因真核表达质粒的构建及对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用
作者:
刘宝瑞
徐智
沈苏南
禹立霞
钱晓萍
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
肝癌
CD40L
质粒
真核表达载体
摘要:
目的:构建含人CD40 ligand(CD40L)基因的真核表达载体,并使之在人肝癌细胞HepG2中表达,研究CD40L稳定表达对HepG2细胞的影响.方法:从人外周血单个核细胞总RNA中经RT-PCR扩增出人CD40L基因,经过酶切连接进入真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His(-)A制备重组质粒.重组质粒经酶切及测序证实人CD40L基因成功克隆进入真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His(-)A,并进一步转入大肠杆菌(E.coli DH5α)大量扩增.实验分4组,A组HepG2细胞转染重组质粒,B组HepG2细胞转染不含CD40L cDNA的空质粒,C组HepG2细胞正常培养,D组HepG2细胞加入G418作为转染对照.RT-PCR及流式细胞术鉴定A,B,C 3组细胞表面CD40L和CD40的表达后,A,B,C 3组细胞分别设6个复孔培养72 h后,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布和Fas表达.结果:测序结果显示人CD40L基因真核表达质粒CD40L-pcDNATM3.1/myc-His(-)A构建成功.流式细胞术检测A组HepG2细胞表面CD40L表达为39.7%,CD40表达为15.4%;B和C组细胞表面仅有CD40表达,分别为31.7%和28.5%.A组细胞凋亡率45.0±0.3%,B,C组均未发生明显凋亡(P<0.01).与C组细胞比较,A组细胞周期分布主要阻滞在G1期(90.4±1.3% vs 60.6±1.5%,P<0.01),S期(6.32±1.0% vs12.0±0.7%)和G2/M期分布(3.3±0.7% vs 27.3±1.2%)均有减少(P<0.01).A组细胞Fas表达率(27.8±1.5%)较B组(3.2±0.8%)和C组(4.2±1.0%)明显上调(P<0.01).结论:我们构建的人CD40L基因真核表达质粒CD40L-pcDNATM3.1/myc-His(-)A可以在人肝癌细胞HepG2中稳定表达,CD40L对于HepG2细胞具有促凋亡的作用,这可能与CD40L-CD40作用后导致HepG2细胞Fas表达上调和细胞周期阻滞有关.
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篇名
人CD40 ligand基因真核表达质粒的构建及对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用
来源期刊
世界华人消化杂志
学科
医学
关键词
肝癌
CD40L
质粒
真核表达载体
年,卷(期)
2005,(20)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
2413-2419
页数
7页
分类号
R73
字数
4693字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1009-3079.2005.20.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
刘宝瑞
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
304
2126
23.0
31.0
2
钱晓萍
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
188
1652
22.0
30.0
3
沈苏南
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
26
164
7.0
12.0
4
禹立霞
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
63
588
15.0
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5
徐智
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
2
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真核表达载体
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研究去脉
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期刊影响力
世界华人消化杂志
主办单位:
太原消化病研治中心
出版周期:
旬刊
ISSN:
1009-3079
CN:
14-1260/R
开本:
大16开
出版地:
社址:山西省太原市双塔西街77号;办公地址:北京市朝阳区东四环中路62号,远洋国际中心D座903室
邮发代号:
22-117
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
13630
总下载数(次)
16
总被引数(次)
116919
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