TIGAR基因真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的作用初探

• 作者: 倪培华 吴华成 吴蓓颖 樊绮诗 肖家诚 顾志冬
• 来源期刊: 诊断学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子 人肝细胞癌细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 617-622
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4602字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子(TIGAR)全长cDNA的真核表达载体pEGFP-TIGAR,观察TIGAR在人肝细胞HepG2中的作用.方法:RT-PCR技术扩增获得TIGAR全长cDNA,将扩增的产物克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,构成pEGFP-TIGAR的真核表达重组质粒.利用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期、MIB-1(Ki-67抗原测定)法检测细胞增殖、实时荧光PCR检测mRNA表达和Western-blot检测蛋白质的表达.结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-TIGAR,经DNA测序与GenBank中的人TIGAR cDNA序列一致.荧光显微镜观察到转染重组质粒的细胞中有绿色荧光蛋白的表达.检测结果显示,转染pEGFP-TIGAR质粒的HepG2晚期凋亡细胞明显减少(P<0.05);S期细胞百分数则明显增加(P<0.05),增殖能力明显增高(P<0.05).结论:本实验成功构建了pEGFP-TIGAR真核表达质粒,过表达的TIGAR可降低HepG2细胞发生晚期凋亡和促进细胞增殖,为进一步研究TIGAR基因在肿瘤细胞中作用提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪培华	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系	104	442	10.0	13.0
2	樊绮诗	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	48	248	9.0	12.0
3	吴华成	上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科	13	35	4.0	5.0
4	顾志冬	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	24	99	7.0	9.0
5	吴蓓颖	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	13	30	4.0	5.0
6	肖家诚	上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科	12	87	5.0	9.0