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DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG2细胞的作用
DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG2细胞的作用
作者:
倪培华
姜叙诚
徐洪
胡亮
胡翊群
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
损伤调节自噬调质
DRAM
自噬
细胞凋亡
载体
摘要:
目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用.方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒.用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Western blot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体.结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致.LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达.流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P<0.05);Westem blot检测到DRAM蛋白表达明显增高;转染pEGFP-N1的HepG2细胞超微结构基本正常,转染DRAg的一些细胞中可见自噬体.结论:本研究成功构建了表达DRAM的真核质粒,并在HepG2细胞中表达,DRAM在肿瘤细胞存在双向效应,既可诱导HepG2细胞发生自噬性死亡,又可促进HepG2细胞增殖.
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文献信息
篇名
DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG2细胞的作用
来源期刊
诊断学理论与实践
学科
生物学
关键词
损伤调节自噬调质
DRAM
自噬
细胞凋亡
载体
年,卷(期)
2009,(2)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
165-170
页数
6页
分类号
Q52|Q78
字数
5592字
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
倪培华
上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系
104
442
10.0
13.0
2
胡翊群
上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系
39
391
10.0
19.0
3
姜叙诚
上海交通大学医学院基础医学院病理学教研室
36
155
7.0
10.0
4
徐洪
上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室
21
39
4.0
4.0
5
胡亮
上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室
15
41
4.0
6.0
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引文网络
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共引文献
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参考文献
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节点文献
引证文献
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同被引文献
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(0)
1975(1)
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二级参考文献(1)
1998(1)
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二级参考文献(1)
1999(1)
参考文献(0)
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2000(1)
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2001(2)
参考文献(1)
二级参考文献(1)
2002(2)
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二级参考文献(3)
2009(0)
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二级引证文献(0)
2014(1)
引证文献(1)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
损伤调节自噬调质
DRAM
自噬
细胞凋亡
载体
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
诊断学理论与实践
主办单位:
上海交通大学医学院附属瑞金医院
出版周期:
双月刊
ISSN:
1671-2870
CN:
31-1876/R
开本:
大16开
出版地:
上海市瑞金二路197号
邮发代号:
4-687
创刊时间:
2002
语种:
chi
出版文献量(篇)
3068
总下载数(次)
5
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