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摘要:
目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用.方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒.用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Western blot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体.结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致.LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达.流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P<0.05);Westem blot检测到DRAM蛋白表达明显增高;转染pEGFP-N1的HepG2细胞超微结构基本正常,转染DRAg的一些细胞中可见自噬体.结论:本研究成功构建了表达DRAM的真核质粒,并在HepG2细胞中表达,DRAM在肿瘤细胞存在双向效应,既可诱导HepG2细胞发生自噬性死亡,又可促进HepG2细胞增殖.
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文献信息
篇名 DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG2细胞的作用
来源期刊 诊断学理论与实践 学科 生物学
关键词 损伤调节自噬调质 DRAM 自噬 细胞凋亡 载体
年,卷(期) 2009,(2) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 165-170
页数 6页 分类号 Q52|Q78
字数 5592字 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 倪培华 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系 104 442 10.0 13.0
2 胡翊群 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系 39 391 10.0 19.0
3 姜叙诚 上海交通大学医学院基础医学院病理学教研室 36 155 7.0 10.0
4 徐洪 上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室 21 39 4.0 4.0
5 胡亮 上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室 15 41 4.0 6.0
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损伤调节自噬调质
DRAM
自噬
细胞凋亡
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诊断学理论与实践
双月刊
1671-2870
31-1876/R
大16开
上海市瑞金二路197号
4-687
2002
chi
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