HIV-1 B亚型核心蛋白gag基因真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

• 作者: 师永霞 张宝 李凌 李德良 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人类免疫缺陷病毒 pcDNA3.1(+) gag 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 526-529
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.06.010

摘要

目的克隆人类免疫缺陷病毒Ⅰ型B亚型核心蛋白gag基因,构建真核表达载体,并在真核细胞中表达,为进一步制备自行设计的以λ噬菌体作为载体的HIV核酸疫苗奠定基础.方法以克隆好的HIV-1B亚型U26942全基因质粒DNA作为模板,根据Genbank中gag基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5'端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性的扩增gag基因.TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含gag编码基因的真核表达载体,并进行酶切鉴定分析pcDNA3.1(+)/gag.在脂质体介导下转染HepG2细胞,经G418压力筛选建立稳定转染gag基因的细胞系,用RT-PCR及Western印迹检测其在HepG2细胞中的表达.结果重组质粒经BamHⅠ、 XhoⅠ双酶切成5.4kb与1.5kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了gag基因片断,测序结果表明编码框正确.RT-PCR及Western印迹证实稳定转染gag基因的HepG2细胞系中有该基因的表达.结论成功构建了HIV-1 B亚型核心蛋白gag基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/gag,并在HepG2细胞中获得稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	郑文岭	南方医科大学基因工程研究所	121	603	11.0	20.0
3	张宝	南方医科大学基因工程研究所	60	148	7.0	8.0
4	李凌	南方医科大学基因工程研究所	38	132	6.0	9.0
5	师永霞	南方医科大学基因工程研究所	11	30	3.0	5.0
6	李德良	南方医科大学基因工程研究所	8	16	3.0	4.0