人MT1-MMP真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达及意义

• 作者: 孟刚 张扬 王广义 蔺勇
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 膜型基质金属蛋白酶1 基因转染 真核表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 64-67
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆人膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)基因,构建真核表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人正常肝组织中扩增MT1-MMP全长cDNA,将之与pMD18-T载体连接,测序后将该片段亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中.将构建好的pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经酶切鉴定后,采用脂质体法转染入HepG2细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株.应用RT-PCR检测转染前后该细胞株MT1-MMP mRNA表达水平.结果:①RT-PCR获得长度约为704 bp的目的片段,与预期片段相符;②将pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,得到约5 400 bp和704 bp两个片段,测序结果证实所插入目的片段与GenBank中MT1-MMP cDNA序列匹配;③重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平(1.66±0.43)明显高于空质粒组(1.21±0.25)和对照组(1.19±0.18)(P＜0.01).结论:成功构建pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体,并在人肝癌细胞株HepG2中稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王广义	吉林大学第一医院普通外科	338	1618	17.0	26.0
2	张扬	吉林大学药学院微生物与生化药学教研室	57	292	9.0	15.0
3	蔺勇	吉林大学第一医院神经内科	18	229	7.0	15.0
7	孟刚	吉林大学第一医院普通外科	3	5	2.0	2.0