杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨

• 作者: 周宇麒 张天托 李林 胡波 黄静
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 杀菌/通透性增加蛋白 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 临床免疫学
• 页码范围: 385-389
• 页数: 5页
• 分类号: R503.11
• 字数: 5378字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建编码杀菌/通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达重组蛋白.方法:采用RT-PCR技术,从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因,DNA序列分析鉴定;将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD/Thio-TOPO中,再次测序鉴定;通过在大肠杆菌中以L-阿拉伯糖进行诱导表达,然后以SDS-PAGE、Western blot对表达的重组蛋白进行分析.重组蛋白经初步纯化处理后,进行生物学活性检测.结果:RT-PCR扩增出一个835 bp的DNA片段,DNA测序表明为所需目的基因.限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明,BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD/Thio-TOPO中,SDS-PAGE和Wester blot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段.对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性.结论:成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达,表达的重组蛋白具有一定的生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张天托	中山大学附属第三医院内科	132	760	13.0	19.0
2	黄静	中山大学附属第三医院内科	74	511	11.0	18.0
3	周宇麒	中山大学附属第三医院内科	67	421	9.0	18.0
4	胡波	中山大学附属第三医院分子生物实验室	62	272	9.0	13.0
5	李林	中山大学附属第三医院分子生物实验室	28	188	7.0	13.0