携反义mrp和mdr1双耐药基因的重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 严律南 张明满 李德华 胡海洋 苏芝 苟兴华 赵兰英 赵永恒 韩蕾 黄迎春
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 反义RNA技术 多药耐药 重组腺相关病毒 肝细胞肝癌
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 765-769
• 页数: 5页
• 分类号: R657.3|R735.7
• 字数: 4068字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.06.002

摘要

目的构建携带反义多药耐药相关蛋白基因(mrp)和反义多药耐药基因(mdr1)双耐药基因的重组腺相关病毒载体,以用于逆转肝细胞癌(HCC)多药耐药(MDR)的研究.方法将mrp基因cDNA5′端500 bp的基因片段与mdr1基因cDNA5′端600 bp的基因片段,用基因片段重叠法连接成为新的基因片段(mrp+mdr1),并反向克隆到重组腺相关病毒载体系统(AAV Helper-Free System)表达质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点,构建出重组表达质粒pAAV-IRES-hrGFP-(mrp+mdr1)AS;再将pAAV-IRES-hrGFP-(mrp+mdr1)AS与AAV Helper-Free System中的控制质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用脂质体转染法共转染293细胞,生成新型重组腺相关病毒载体rAAV2-(mrp+mdr1)AS.结果成功构建并包装出新型重组腺相关病毒载体rAAV2-(mrp+mdr1)AS,病毒滴度达2.5×108 efu/ml.结论构建的rAAV2-(mrp+ mdr1)AS可望能将反义mrp和mdr1基因片段导入HCC耐药细胞株.