MDR1基因RNAi逆转录病毒载体的构建及表达

• 作者: 刘扬 刘晓冬 马淑梅
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNAi MDR1 逆转录病毒载体 乳腺癌
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.01.002

摘要

目的:构建并鉴定MDR-1基因沉默载体pSUPER-retro-puro-shRNA(MDR1),并检测其对于乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR耐药表型的逆转效果.方法:根据MDR-1基因序列,利用在线软件IDTdna设计2个干扰MDR-1基因的寡聚核苷酸序列,合成回收DNA序列退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和测序分析后,再转染293T包装细胞产生病毒颗粒后感染MCF-7/ADR细胞.用RTPCR检测MDR1基因mRNA表达,Western blotting测定转染后MCF-7/ADR细胞中P-gp蛋白的表达量.结果:重组MDR基因沉默载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析证实插入60 bp序列与原序列一致,位置正确;与对照组比较,转入MCF-7/ADR细胞后RT-PCR结果显示MDR mRNA水平明显下降,Western blotting显示P-gp蛋白表达量明显降低.结论:逆转录病毒MDR1基因沉默载体构建成功,并在MCF-7/ADR细胞中起到抑制MDR1基因表达的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘扬	吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室	54	289	10.0	14.0
2	刘晓冬	吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室	47	173	7.0	10.0
3	马淑梅	吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室	24	95	6.0	8.0