三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

• 作者: 倪勤 刘克洲 姚航平 羊正纲 陈智
• 来源期刊: 浙江大学学报(工学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 小干扰核糖核酸(siRNA) 核糖核酸多聚酶III启动子 筛选 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 生物医学工程
• 页码范围: 1086-1090
• 页数: 5页
• 分类号: R318.5
• 字数: 4152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-973X.2005.07.036

摘要

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(small interfering RNA siRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈智	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	162	1080	15.0	27.0
2	刘克洲	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	66	345	10.0	16.0
3	姚航平	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	94	547	12.0	17.0
4	羊正纲	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	11	54	4.0	7.0
5	倪勤	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	13	70	6.0	8.0