禽U6启动子的克隆、序列分析及其驱动的siRNA表达

• 作者: 夏晓莉 孙怀昌 张鑫宇 沈鹏鹏 王永娟
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽U6启动子 克隆 序列分析 转录活性
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 3003-3008
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 3614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.08.046

摘要

[目的]分离用于禽源细胞中表达短干扰RNA(short interference RNA,siRNA)的禽u6启动子.[方法]以鸡基因组为模板进行PCR扩增,将扩增产物进行序列测定和生物信息学分析,并将其插入报告基因载体pEGFP-N1中,获得siRNA表达载体pGFP-U6,将由软件预测针对GFP基因的siRNA所对应的shRNA(short hairpinRNA)插入其中,获得pGFP-U6-shRNA;以含人H1启动子的siRNA表达载体pGFP-H1-shRNA为对照,分别转染COS-1和DF-1细胞,用荧光显微镜和流式细胞仪测定转染细胞培养中GFP阳性细胞数和荧光总量.[结果]克隆的u6启动子位于鸡28号染色体,与发表的鸡U6-3启动子同源性为97.2%,含多个0ct-1序列,不合CACCC框、SPH和PSE等聚合酶Ⅲ启动子序列,TA框不典型;在pGFP-U6-shRNA转染的哺乳动物源COS-1细胞培养中,GFP阳性细胞数和荧光总量均有所下降,但不如pGFP-H1-shRNA转染细胞显著;在pGFP-U6-shRNA转染的禽源DF-1细胞培养中,不仅GFP阳性细胞数和荧光总量显著下降,而且基因沉默效果显著优于pGFP-H1-shRNA转染细胞.[结论]成功克隆的禽u6启动子不仅能有效转录siRNA,而且转录活性具有相对的细胞种属特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张鑫宇	扬州大学兽医学院	40	142	6.0	10.0
3	夏晓莉	扬州大学兽医学院	24	78	6.0	8.0
4	王永娟	扬州大学兽医学院	15	45	4.0	5.0
8	沈鹏鹏	扬州大学兽医学院	2	7	1.0	2.0