三氧化二砷体外诱导人HepG2细胞铁蛋白基因表达的研究

• 作者: 刘妍 刘开泰 吴顺华 张跃新 成军 郑玉建
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 三氧化二砷 HepG2细胞 铁蛋白 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 596-598
• 页数: 3页
• 分类号: R318.04
• 字数: 2375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2005.07.017

摘要

目的了解低剂量三氧化二砷诱导的HepG2细胞的差异表达基因,揭示慢性砷中毒对肝细胞损伤的作用机制.方法在体外用三氧化二砷(5靘ol/L)处理HepG2细胞,同时以PBS处理的相同细胞系作为对照;24h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果成功构建三氧化二砷处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到109个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1 000bp插入片段.挑取含有插入片段的36个克隆进行测序,通过生物信息学分析发现铁蛋白重链和轻链在三氧化二砷诱导的肝HepG2细胞正向消减cDNA文库中显著上调,共有8个阳性克隆子.结论低剂量三氧化二砷刺激细胞后可诱导铁蛋白的表达上调,暗示铁蛋白在砷诱导的肝细胞损伤中起作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘妍	解放军第302医院基因治疗研究中心	62	535	12.0	21.0
2	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0