SARS-CoV 5'UTR在基因转录中的启动子活性

• 作者: 史小玲 张建军 张晓峰 黄爱龙
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: SARS-CoV 非翻译区 启动子
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 1224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2006.01.002

摘要

目的了解SARS-CoV不同毒株5'UTR RNA的构成特点和差异及其空间结构;研究该序列在真核细胞中的启动子活性.方法用软件DNASrar-MegAlign和BLAST分析SARS-CoV5'UTR序列同源性、RNADraw3.0预测二级结构;构建5'-UTR cDNA序列驱动的荧光素酶基因表达质粒pGL3-5'UTR,转染HepG2细胞,检测萤火虫荧光素酶的表达;构建一套缺失突变质粒,使其分别3'端残留三个、两个、一个和零个(完全缺失)茎环,检测报告基因的表达;采用5'RACE,查找转录起始位点;将pGL3-5'UTR转染A549、HepG2、VeroE6、HeLa和ECV304,检测报告基因的表达差异.结果SARS-CoV 5'UTR全长为264nt,18株有缺失突变均位于5'端.101个SARS-CoV 5'UTR序列中,共发现5个点突变位置;SARS-CoV 5'UTRRNA可形成稳定的二级结构.Stem-loop-Ⅱ含多个茎环结构,形成复杂的假结;pGL3-5'-UTR有明显的萤火虫荧光素酶表达;当4个茎环都具备时,荧光素酶相对活性是SV40启动子的约43%;失去第一个茎环后,是SV40启动子的约45%;而失去前两个后,则不表达荧光素酶;转录起始位点在SARS-CoV 5'UTR的第56位核苷酸;在五种不同细胞中,表达强度由高到低依次是:A549、HepG2、ECV304、HeLa和Vero E6.结论①SARS-CoV 5'UTR序列保守,二级结构可形成4个茎环结构域;②SARS-CoV 5'UTR有启动子活性;③在二级结构中,与启动子活性有关的结构域在前两个茎环;④SARS-CoV 5'UTR在调控基因转录时,第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用;⑤多种组织或器官都可为SARS-CoV 5'UTR发挥启动子功能提供辅助因子,而以肺源性细胞最为适合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张建军	重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育重点实验室	48	144	7.0	10.0
3	黄爱龙	重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育重点实验室	236	1190	16.0	23.0
6	史小玲	泸州医学院附属医院感染病科	47	121	6.0	7.0
7	张晓峰	泸州医学院附属医院感染病科	1	0	0.0	0.0