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摘要:
目的构建adenomatous polyposis coli(APC)基因启动子1A的甲基化阳性质粒标准品,对甲基化特异性基因扩增(meth-ylation specific PCR,MSP)的检测灵敏度进行质量控制.方法对脐血淋巴细胞DNA转甲基并化学修饰,制备甲基化阳性和阴性模板,MSP后获得目的片段,克隆到pMD18-T质粒载体,测序筛选阳性和阴性质粒标准品,紫外分光法对标准品定量,对10倍梯度稀释的质粒进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR来获得弱阳性质控品,对36份组织样本进行MSP检测.结果将MSP后电泳能显示的质粒(105拷贝/ml)作为弱阳性质控品.在加入弱阳性质控品后,2例阴性的样本最终定为阳性;11例未定结果的样本最终7例定为阳性,4例定为阴性.36例样本无质控品前的甲基化阳性率为25%,有质控品后的阳性率为50%,两次结果差异显著(P=0.001).结论构建了携带甲基化阳性的APC基因启动子的质粒标准品并制备了低拷贝的弱阳性质控品,可以对MSP检测灵敏度进行质量控制,降低了检测的假阴性率.
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内容分析
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文献信息
篇名 甲基化特异性基因扩增检测过程中的质量控制
来源期刊 临床检验杂志 学科 生物学
关键词 质量控制 甲基化特异性PCR APC基因
年,卷(期) 2006,(1) 所属期刊栏目 研究生园地
研究方向 页码范围 44-47
页数 5页 分类号 Q754
字数 2709字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1001-764X.2006.01.017
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 童明庆 87 998 18.0 26.0
2 黄珮珺 45 354 10.0 16.0
3 潘世扬 85 701 14.0 20.0
4 张寄南 85 506 11.0 19.0
5 张丽霞 39 299 10.0 15.0
6 陈丹 20 144 8.0 11.0
7 魏源华 6 89 5.0 6.0
8 王贤 2 15 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
质量控制
甲基化特异性PCR
APC基因
研究起点
研究来源
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研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
临床检验杂志
月刊
1001-764X
32-1204/R
大16开
南京市中央路42号
28-104
1983
chi
出版文献量(篇)
5950
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39539
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