人骨形态发生蛋白7(hBMP7)在毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 张彦定 陈凌 黄义德
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨形态发生蛋白-7 毕赤酵母 密码子偏好性 定点突变
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 907-913
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 5864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2006.06.007

摘要

依据酵母密码子使用偏好性,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)介导的定点突变方法,对人骨形态发生蛋白-7(human Bone Morphogenetic Protein-7, hBMP7)成熟肽编码序列进行改造,将毕赤酵母低频使用的精氨酸密码子CGG或CGA突变为高频使用的同义密码子AGA,明显提高了hBMP7成熟肽在毕赤酵母中的表达量:摇瓶培养表达量为25.45mg/L,是改造前序列的4.6倍;Tricine SDS-PAGE及Western-blotting结果表明,rhBMP7成熟肽分子量为18kD,以单体形式存在,具有良好的免疫原性;利用梯度浓度G418筛选到一株高拷贝整合的转化子,该转化子摇瓶表达量为45.45mg/L,约为单拷贝转化子的2倍.表达上清经阳离子交换介质SP SepharoseA○R Fast Flow纯化后,目的蛋白纯度达到90%.纯化后的样品与I型胶原混合冻干后埋植于小鼠股部肌袋内,能异位诱导间充质细胞分化形成软骨细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张彦定	福建师范大学生命科学学院	35	204	9.0	13.0
4	黄义德	福建师范大学生命科学学院	24	106	4.0	9.0
6	陈凌	福建师范大学生命科学学院	4	20	2.0	4.0