采用酵母双杂交法筛选PSRPK相关蛋白基因

• 来源期刊: 深圳大学学报（理工版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 多头绒泡菌 酵母双杂交 PSRPK Plasmin C BCAT类似蛋白 MSF1类似蛋白 mixed-linked glucanase precursor类似蛋白 FCY1p类似蛋白 40S ribosomal protein S2类似蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 化学与生命科学
• 页码范围: 222-229
• 页数: 8页
• 分类号: Q2
• 字数: 6171字
• 语种: 中文

摘要

本课题组在前期研究中,从多头绒泡菌中分离到一个SR蛋白激酶基因psrpk,并将其编码蛋白命名为PSRPK(SR protein kinase of Physarum Polycephalum).为分离PSRPK相关蛋白基因以了解PSRPK的功能,构建了转化率为2×106转化子/3 μg pGADT7-Rec、密度为5.35×108 cells/mL、滴度为2.34×109 cfu/mL的多头绒泡菌酵母双杂交AD库.以PSRPK为饵蛋白筛选该文库得到接合率为41.18%的杂交酵母,在SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His培养板上筛选获得1476个杂交克隆,其中,X-gal滤纸显色呈强蓝色的克隆有342个.对大于500 bp的67个克隆测序获得35个cDNA片段,其中编码Plasmin C、branched-chain amino acid aminotransferase (BCAT)类似蛋白、MSF1类似蛋白、mixed-linked glucanase precursor类似蛋白、FCY1p类似蛋白和40S ribosomal protein S2类似蛋白等7个cDNA片段在阳性杂交酵母克隆中出现多次,其余仅出现一次.在35个cDNA片段的编码序列中有15个具有同源蛋白,31个编码序列的丝氨酸含量大于或等于6%,符合激酶底物的组成特征.