酵母双杂交技术筛选α干扰素结合蛋白的基因

• 作者: 刘妍 张玲霞 张黎颖 徐东平 成军 戴久增 曲建慧 杨媛 王琳 郭江 钟彦伟
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干扰素α 酵母菌 双杂交系统技术 克隆,分子 基因
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 235-238
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6680.2006.04.005

摘要

目的 筛选人肝细胞cDNA文库中与α干扰素(IFN α)蛋白具有相互作用的蛋白基因.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增IFN α基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,Western blot证明IFN α蛋白能够在AH109中表达.然后将AH109与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5 α大肠埃希菌并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定正确者进行测序,再行生物信息学分析.结果 成功克隆化IFN α基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选出阳性菌落34个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到8种已知基因:玻璃体连接蛋白、纤维蛋白原α多肽、人类免疫缺陷病毒(HIV)1Tat相互作用蛋白2、精氨酸酶、NADH脱氢酶1β亚复合物、转铁蛋白受体2α、酒精脱氢酶IBβ多肽、肝细胞癌蛋白(HCC-1);2种染色体基因:人染色体17,克隆RP11-350B3,人染色体10,克隆RP11-351O1.结论 成功克隆出IFN α基因,并从肝细胞cDNA文库中筛选出8种能与IFN α具有结合作用的蛋白基因.