大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

• 作者: 孙现超 安德荣 薛杨
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大麦条纹花叶病毒 外壳蛋白 系统发育树 融合蛋白 抗血清
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 397-403
• 页数: 7页
• 分类号: S4
• 字数: 3646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0412-0914.2006.05.003

摘要

首次用PCR方法,自大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)的RNA2(GenBank登录号为:AY789694,未报道)中扩增出外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析.结果表明BSMV-CH的CP全长597bp,它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93.1%～93.8%和91.4%～92.4%;与同属的早熟禾半潜病毒(PSLV)和剪秋罗环斑病毒(LRSV)的核苷酸同源性分别为53.0%和41.8%,氨基酸同源性分别为48.1%和40.0%.根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树,分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性.把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上,优化IPTG诱导终浓度后,在37℃IPTG终浓度为1.0 mmol/L时,融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达.12%SDS-PAGE表明,表达产物大小为48.5kDa,主要以包含体形式存在.对蛋白进行定量后,用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗原,免疫家兔得到抗血清,酶联法(enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)测定的抗血清效价为1/6 400.用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测,结果表明抗血清有很高特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安德荣	西北农林科技大学植物保护学院	92	1323	21.0	32.0
2	孙现超	西北农林科技大学植物保护学院	6	63	5.0	6.0
3	薛杨	西北农林科技大学植物保护学院	2	9	2.0	2.0