无血清悬浮培养昆虫细胞表达人纤溶酶原Kringle5的研究

• 作者: 刘戈飞 黄东阳
• 来源期刊: 汕头大学医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 无血清培养 昆虫细胞 杆状病毒载体表达系统 Kringle5
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4819字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4716.2006.01.001

摘要

目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达.方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化.构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的方法制备重组病毒贮存液.Western方法确定Kringle5在Sf9细胞中的表达形式和表达条件.在培养体积为500 mL的无血清悬浮培养条件下对Kringle5进行表达.应用Ni2+亲合层析纯化了表达的重组蛋白,去除了氨基端融合的His-tag.应用原代培养人脐静脉内皮细胞测定了重组Kringle5的活性.结果:重组Kringle5蛋白的产量为1.7 mg/L,半数有效剂量(ED50)为109.2 nmol/L,去除氨基端His-tag序列后获得的Kringle5 ED50为59.59 nmol/L.结论:Kringle5可以在无血清悬浮培养Sf9细胞中进行高效表达,研究结果为进行Kringle5的大规模高效表达奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘戈飞	汕头大学医学院分子生物学中心	26	107	6.0	9.0
2	黄东阳	汕头大学医学院分子生物学中心	51	423	10.0	19.0