人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达

• 作者: 张素娟 杨冠 荫俊 赵小玲 陈伟强
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 狂犬病病毒 二硫键稳定性Fv抗体 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 124-127
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 4312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.02.014

摘要

目的构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv(dsFv)抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsFv抗体片段.方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsFv抗体的重、轻链(VH、VL)突变基因,Nde Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后分别插入pET-22b(+)表达质粒中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.将VL、VH包涵体蛋白经盐酸胍变性,按比例混合在复性折叠缓冲液中,使二者折叠形成dsFv抗体片段.并以其母本抗体scFv作对照,对其抗原特异性和稳定性进行初步评价.结果在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功构建了抗狂犬病毒dsFv抗体基因,并在原核系统中实现了对二者的高效表达,VH、VL蛋白在复性缓冲液中正确折叠形成了dsFv抗体片段.结论对筛选获得的抗狂犬病毒scFv成功进行了稳定性改构,制备了有活性的dsFv抗体片段,改构以后的dsFv保持了对狂犬病毒的特异结合活性,而其在血清中的稳定性有明显改进,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张素娟		8	28	4.0	5.0
2	陈伟强	天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所	1	5	1.0	1.0
3	杨冠	军事医学科学院生物工程研究所	8	50	4.0	7.0