布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的表达纯化及生物活性鉴定

• 作者: 刘艳丽 司瑞 吴兴安 张芳琳 徐志凯 白文涛 胡刚 阎岩
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁菌 核糖体蛋白L7/L12 ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 872-874
• 页数: 3页
• 分类号: Q786|Q503
• 字数: 2962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.06.009

摘要

目的:原核表达系统表达布鲁菌核糖体蛋白L7/L12与GST的融合蛋白GST-L7/L12,并纯化蛋白L7/L12,建立检测特异性抗体的间接ELISA方法.方法:对含有L7/L12的原核表达载体pGEX-4T-1-L7/L12进行了原核表达.利用亲和层析柱分别纯化融合蛋白GST-L7/L12和蛋白L7/L12,并用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定.以L7/L12为抗原包被微量板,优化抗原包被浓度和羊抗鼠IgG-HRP稀释度,建立间接ELISA方法,并检测其特异性.结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量为38 000和12 000处可见纯化蛋白的条带,Western印迹分析表明这2条带均能被免疫兔血清识别,表明获得了纯化的有生物活性的融合蛋白GST-L7/L12和蛋白L7/L12.间接ELISA方法的I7/L12抗原包被浓度为5μg/mL,羊抗鼠酶标二抗稀释度为1:1 000.小鼠免疫血清与I7/L12抗原出现阳性反应,而与布鲁菌融合蛋白OMP31、结核分枝杆菌抗原85b及牛血清白蛋白则呈阴性.结论:成功地对布鲁菌核糖体蛋白L7/L12进行了原核表达和纯化,以其为基础建立的间接ELISA方法稳定且特异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴兴安	第四军医大学微生物学教研室	73	341	11.0	13.0
2	张芳琳	第四军医大学微生物学教研室	76	353	10.0	14.0
3	阎岩	第四军医大学微生物学教研室	20	78	5.0	7.0
4	白文涛	第四军医大学微生物学教研室	51	227	8.0	11.0
5	司瑞	第四军医大学微生物学教研室	28	185	7.0	13.0
6	刘艳丽	第四军医大学微生物学教研室	31	168	7.0	11.0
7	胡刚	第四军医大学微生物学教研室	20	126	6.0	10.0