新疆羊种布鲁氏菌分离株的鉴定与L7/L12蛋白的原核表达和生物信息学分析

• 作者: 付强 刘升 史慧君 孟露萍 张辉 李爽 江雅丽 郭飞 陈创夫
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 羊种布鲁氏菌 L7/L12 蛋白纯化 反应原性 生物学
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 564-573
• 页数: 10页
• 分类号: S852.1|S188
• 字数: 6529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2017.03.022

摘要

[目的]分离并鉴定新疆羊种布鲁氏菌.原核表达该菌的L7/L12蛋白,检测该蛋白的反应原性及进行部分生物学分析.[方法]采用细菌划线培养、形态学观察、PCR检测以及生化试验进行布鲁氏菌分离鉴定.利用常规分子生物学方法表达并纯化羊种布鲁氏菌分离株的L7/L12蛋白,应用Western Blot分析融合蛋白的反应原性.使用生物信息学软件对该蛋白进行了生物信息学分析.[结果]分离鉴定确定该菌株为羊种布鲁氏菌.经过测序与酶切鉴定,正确构建了表达载体pET-28a-L7/L12.SDS-PAGE试验显示纯化的L7/L12蛋白为单一条带;经过Western Blot检测,该融合蛋白具有良好的反应原性.生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构α-螺旋为主并利用 Phyre2 服务器成功构建了该蛋白的三维模型.[结论]鉴定出该分离菌株,表达并纯化了该菌的L7/L12融合蛋白,Western Blot证明该蛋白具有良好的反应原性,为后续该蛋白的亚单位疫苗研究奠定了基础.