人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达

• 作者: 卢春 姚水洪 曾怡 秦娣 程林 陈秀英
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类疱疹病毒8型 K9 病毒干扰素调节因子 真核表达
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1145-1149
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2006.12.001

摘要

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virus interferon regulatory factor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达.方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5'端分别引入Hind Ⅲ和BamH Ⅰ酶切位点.以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pK9.为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5'端引入了Flag序列.以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1(+)中,得到重组质粒pK9F.重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况.结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1 380 bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中已经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在K9预期位置检测到特异性条带.结论:HHV-8 K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	曾怡	南京医科大学微生物学与免疫学系	27	93	5.0	6.0
3	陈秀英	南京医科大学微生物学与免疫学系	23	75	5.0	8.0
4	程林	南京医科大学微生物学与免疫学系	4	13	2.0	3.0
5	姚水洪	南京医科大学微生物学与免疫学系	2	12	2.0	2.0
6	秦娣	南京医科大学微生物学与免疫学系	22	40	4.0	4.0