含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定

• 作者: 吴军 张小容 张尧 江军 贺伟峰 陈勇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 rPB-DR启动子 TK基因 前列腺癌 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1043-1045
• 页数: 3页
• 分类号: R373|R394-33|R394.3
• 字数: 2937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.10.015

摘要

目的构建含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为前列腺癌基因治疗的研究奠定基础.方法应用分子克隆技术,将rPB-DR启动子连接至pBluescript SK-TK上构建出pBluescript SK-rPB-DR-TK,再酶切出rPB-DR-TK目的片断,并将其连接至穿梭质粒pShuttle上.将构建好的pShuttle-rPB-DR-TK经Pme Ⅰ单切线性化后再以电穿孔法转化至E.coli.BJ 5183-AdEasy-1内进行同源重组,抽提质粒经卡那抗性筛选及酶切鉴定正确的即为pAd-rPB-DR-TK,再经Pac Ⅰ酶切回收后以脂质体法转染人胚肾293细胞,包装出完整腺病毒,然后大量扩增测定滴度,并行PCR鉴定.结果经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了包含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒pAd-rPB-DR-TK,包装、扩增后测病毒滴度为1.1×108 TCID50/ml.结论成功构建出包含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步前列腺癌基因治疗的研究中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈勇	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	80	792	16.0	23.0
2	江军	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	134	692	14.0	17.0
3	张尧	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	49	282	9.0	13.0