人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究

• 作者: 姚航平 孟海涛 童向民 金洁 钱文斌
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素18 端粒,末端转移酶 基因表达 端粒酶逆转录酶 融合 蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 360-365
• 页数: 6页
• 分类号: R394.3
• 字数: 4694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2006.04.003

摘要

目的:以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)融合基因,并观察其生物学功能.方法:健康人单核细胞经RT-PCR扩增hIL-18后、T-A克隆.亚克隆至经Nhe Ⅰ、Hind Ⅲ酶切的PCDNA3.1(+)/hTERT中,限制性内切酶验证后,挑选出含有目标基因的正确克隆.经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中.将hTERT/hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T3细胞中表达,经Western-blot验证目的基因表达产物,同时对转染细胞作免疫荧光染色.以ELISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌γ干扰素的能力,以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力.结果:hTERT/ hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA3.1(+)构建成功,经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析,该基因片段与NCBI基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99.9%;而细胞转染后经Western-blot验证,hTERT/hIL-18融合蛋白的分子量约127 kMr,与预期一致,荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达.此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素,并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能.结论:本实验构建的PCDNA3.1(+)/hTERT- hIL-18质粒能够在真核细胞中表达,并具有生物学功能,为进一步转染树突状细胞,研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金洁		6	39	4.0	6.0
2	姚航平	浙江大学传染病研究所	94	547	12.0	17.0
3	童向民		3	18	3.0	3.0
4	钱文斌		5	20	4.0	4.0
5	孟海涛		3	12	3.0	3.0