hITF毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达

• 作者: 吕尚军 孙勇 张勇 彭曦 汪仕良
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人肠三叶因子 毕赤巴斯德酵母 分泌表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 527-530
• 页数: 4页
• 分类号: R379|R394-33|R394.3
• 字数: 3874字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.06.011

摘要

目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础.方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF.BspH I线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeocin筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因.阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tricine SDS-PAGE分析及Western blot检测.结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中.Tricine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础.