禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘丽玲 包红梅 李一经 王昱 王秀荣 陈化兰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 一步法RT-PCR 快速诊断
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 701-706
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5|Q503
• 字数: 5353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.09.004

摘要

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断,根据流感病毒的M基因序列,在保守区内用Oligo4.0软件设计了1对引物,建立了一步法RT-PCR诊断方法,其目的片段大小为229 bp.通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测,结果显示,病毒尿囊液的最低检出稀释度为1:104;阳性棉拭子的最低检出稀释度为1:23.用病毒分离法和一步法RT-PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品,二者符合率为100%,但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍.用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原,所有禽流感病毒均有229 bp的目的条带出现,而其他14种禽病病原均无目的条带出现,表明该方法的特异性好.