携带OPCML基因的慢病毒表达质粒的构建

• 作者: Barbara C.Vanderhyden Kenneth Garson 姚德生 李力
• 来源期刊: 现代妇产科进展
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,OPCML 卵巢肿瘤 慢病毒载体 基因转移
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 518-521,插1
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7379.2006.07.009

摘要

目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒.方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI-OPCML、pCMV-dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI-OPCML在细胞中OPCML的表达.结果:(1)pWPI-OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI-OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达.结论:pWPI-OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	姚德生	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	90	398	11.0	15.0
3	Kenneth Garson	加拿大渥太华大学癌症中心	6	23	3.0	4.0
4	Barbara C.Vanderhyden	加拿大渥太华大学癌症中心	4	21	3.0	4.0