TK基因慢病毒载体质粒的构建及慢病毒表达系统的建立

• 作者: 姜晓丹 徐如祥 戴学军 曹晖 林健 王伟民 蒋立新 袁振华
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 慢病毒载体 质粒 9L细胞
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 334-337
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3349字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2007.04.009

摘要

目的:构建人单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的慢病毒载体质粒,并建立其慢病毒表达系统.方法:利用酶切分别获取目的基因TK片段及慢病毒pLenti6/V5载体片段,将目的基因插入载体相应酶切位点,构建pLenti6/V5-TK质粒.构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定.利用慢病毒表达系统(ViraPowerTM Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pLP1,pLP2,pLP/VSVG) 4质粒共转染293T细胞,48 h后收集培养上清并感染大鼠胶质瘤细胞9L,抗稻瘟菌素(blasticidin, BSD)筛选9L/TK细胞.MTT方法测试更昔洛韦(ganciclovir GCV)对体外培养的9L/TK细胞杀伤效果.结果与结论:构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(transducing units,TU)/ml.经BDS筛选的9L/TK细胞对GCV杀伤敏感.成功构建了TK基因慢病毒载体质粒pLenti6/V5-TK,并建立了其慢病毒表达系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王伟民	广州军区广州总医院神经外科	137	694	12.0	17.0
2	徐如祥	南方医科大学珠江医院神经外科	123	715	14.0	18.0
3	姜晓丹	南方医科大学珠江医院神经外科	73	424	11.0	16.0
4	林健	南方医科大学珠江医院神经外科	24	156	7.0	11.0
6	戴学军	广州军区广州总医院神经外科	6	23	2.0	4.0
9	袁振华		1	1	1.0	1.0
10	曹晖		1	1	1.0	1.0