乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 万艳平 李金丽 王静 蒋永林 蔡恒玲
• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乙肝病毒(HBV) X基因 X蛋白 真核表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 320-323
• 页数: 4页
• 分类号: R373.21
• 字数: 2856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2006.03.002

摘要

目的 构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因的真核表达载体,为探讨HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据.方法 用PCR方法 扩增含EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的X基因序列,对pcDNA3.1(+)载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HBV X基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx.用梭华-SofastTM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞,细胞裂解液经SDS-PAGE及转硝酸纤维素膜后做Western blotting,鉴定目的蛋白.结果 双酶切pcDNA3.1(+)-HBx后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为5.4 kb和465 bp片断,说明X亚克隆入pcDNA3.1(+),经序列测定其含有完整的X基因片段; Western blotting结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx,并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万艳平	南华大学病原生物学研究所	157	780	13.0	20.0
2	蔡恒玲	南华大学病原生物学研究所	40	109	6.0	8.0
3	王静	南华大学病原生物学研究所	8	42	4.0	6.0
4	蒋永林	南华大学病原生物学研究所	5	12	3.0	3.0
5	李金丽	南华大学病原生物学研究所	7	18	3.0	3.0