体外连接法构建重组人γ干扰素腺病毒并检测其在真核细胞中的表达

• 作者: 刘然义 李焱 田伏洲 薛刚 黄文林
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤 基因治疗 IFNγ 体外连接法 腺病毒载体 表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 771-774
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2006.06.023

摘要

背景与目的:γ干扰素(interferon-γ,IFNγ)具有直接促进某些肿瘤细胞凋亡和调节细胞免疫的功能,因此在肿瘤的基因治疗中IFNγ将发挥重要的作用.本研究构建携带人IFNγ cDNA的重组腺病毒,并检测它在真核细胞中的表达.方法:用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)从人外周血单个核细胞中扩增出IFNγ的cDNA全长序列,插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,经酶切和DNA测序鉴定,然后用体外连接法构建重组腺病毒Ad-IFNγ.用所构建的重组Ad-IFNγ感染HepG2细胞,通过RT-PCR和免疫组织化学法检测IFNγ的表达.结果:经测序,克隆的人IFNγcDNA序列与GenBank上公布的序列完全一致;Ad-IFNγ感染的HepG2细胞在转录和翻译水平均有IFNγ的表达.结论:体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;所构建的重组腺病毒Ad-IFNγ能表达IFNγ蛋白,可用于抗肿瘤和抗病毒等细胞及动物实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田伏洲	成都军区总医院全军普通外科中心	244	1820	21.0	33.0
2	李焱		119	779	13.0	25.0
4	薛刚	成都军区总医院全军普通外科中心	54	215	9.0	10.0
5	刘然义		28	126	6.0	10.0
7	黄文林		40	232	8.0	13.0