提高窖蛋白基因扩增特异性的逆转录聚合酶链方法

• 作者: 徐阳炎 杨慧龄 涂剑 游咏 覃丽
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 硫化修饰 校正聚合酶
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 3854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2006.01.014

摘要

目的建立一种可消除逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)中非特异条带生成,提高逆转录聚合酶链反应精确度的PCR体系.方法最近作者报道了硫化修饰的引物结合具有校正活性聚合酶可提高PCR反应特异性,但其抑制非特异性扩增的效率有待进一步验证和精确测定.用小鼠窖蛋白1(caveolin-1,Cav 1)中1对引物,ECV304细胞、HepG2细胞、小鼠肝、主动脉血管组织逆转录cDNA以及含人窖蛋白基因的倍比稀释质粒为模板,比较普通RT-PCR反应与硫化修饰引物结合不同校正活性聚合酶对非特异性扩增的抑制效率.结果引物3′末端硫化修饰结合具有校正活性的聚合酶可特异性关闭PCR反应中引物3′末端与模板非特异结合而引起的非特异性扩增,只允许引物3′末端与模板完全匹配的延伸反应得以进行.与普通PCR反应相比,能有效抑制50 μL体系中,50 ng约含2×104不匹配模板拷贝数的非特异扩增.结论引物3′端引入抗酶切的硫化修饰后,引物与模板非特异结合将由于校正活性聚合酶长期停留在试图纠正引物与模板不一致状态而得不到有效延伸,提高了PCR反应的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧龄	湖南省衡阳市南华大学附一医院临床医学研究所	2	17	2.0	2.0
3	徐阳炎	湖南省衡阳市南华大学药物药理研究所	1	8	1.0	1.0
9	游咏	湖南省衡阳市南华大学附一医院临床医学研究所	3	10	2.0	3.0
10	覃丽	湖南省衡阳市南华大学药物药理研究所	1	8	1.0	1.0
11	涂剑	湖南省衡阳市南华大学药物药理研究所	1	8	1.0	1.0