银松素合酶基因地高辛标记RNA探针的合成

• 作者: 叶冰莹 林志楷 许玉芬 郭晋隆 陈如凯 陈由强 黄国强 黄庆煌
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 银松素合酶基因 探针 马尾松 芪合酶
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 891-894
• 页数: 4页
• 分类号: Q943
• 字数: 3490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.06.015

摘要

目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针.方法:通过双酶切把PS cDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PS cDNA的特异序列,设计含有SalⅠ和XbaⅠ这2个酶切位点的上、下游引物,用PCR法扩增含有该位点的目的片段,并连接到pBlueskriptⅡKS(+)的多克隆位点上;最后利用pBlueskriptⅡKS(+)上的启动子T7,用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记PS全长及特异序列的反义RNA探针.结果:通过对构建探针的单、双酶切,PCR及电泳鉴定,表明成功合成了PS基因地高辛标记的全长及特异序列的反义RNA探针.结论:RNA探针的合成为后续马尾松PS基因表达的RNA原位杂交研究打下了基础.