铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定

• 作者: 周莹冰 张克斌 李明 申晓冬 胡晓梅 胡福泉 蹇锐 陈志瑾 饶贤才
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 末端酶大亚单位 噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2205-2208
• 页数: 4页
• 分类号: Q55|Q782|Q936
• 字数: 4531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.22.001

摘要

目的 检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力.方法 通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象.结果 成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后.结论 重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.