牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用

• 作者: 刘思国 宫强 张秀华 王春来 邵美丽 郭洋 郭设平
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛分枝杆菌 融合表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 676-680
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61+8
• 字数: 4364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.07.010

摘要

应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段.采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6.转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白.用Ni2+亲合层析的方法纯化该融合蛋白.Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应.用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117).