牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 周向梅 尹晓敏 徐广贤 李晶晶 赵德明
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛分枝杆菌 MPB83基因 克隆 原核表达 免疫印迹 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|S855.2
• 字数: 3425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2006.06.004

摘要

为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化.试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性.