人类α-actin 启动子真核表达载体的构建及应用

• 作者: 华进联 孙永科 杨玉艾 窦忠英
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类α-actin启动子 真核表达载体 小鼠ES细胞 心肌细胞
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1093-1098
• 页数: 6页
• 分类号: Q813
• 字数: 5164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.11.001

摘要

利用PCR技术克隆了人类α-actin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-α-actin-P.应用Lipofectamine 2000将所构建的pEGFP-N1-α-actin-P转染入小鼠ES细胞.通过比较,发现在本实验室条件下,质粒DNA浓度以3.0～5.0 μg/mL,转染时间约在2～3 h最佳.200 μg/mL 的G418较适宜于靶细胞的转染与筛选.得到表达心肌α-actin和GFP的小鼠ES细胞,基本维持小鼠ES细胞的形态.PCNA染色结果表明,转染后的小鼠ES细胞具有增殖能力.α-actin抗体免疫组化染色结果表明,转染后细胞表达α-actin和GFP,揭示构建的真核表达载体pEGFP-N1-α-actin-P转染小鼠ES细胞,可能促进其向心肌细胞分化并对其筛选.