Nogo蛋白的羧基端与连接蛋白26相互作用及在小鼠内耳中的表达

• 作者: 夏昆 潘乾 肖自安 胡鹏 蔡芳 谢鼎华
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 连接蛋白26 酵母双杂交 相互作用蛋白质 Nogo蛋白 内耳
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 492-496
• 页数: 5页
• 分类号: R76
• 字数: 3544字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2006.05.003

摘要

目的 筛选和鉴定连接蛋白26(connexin 26, CX26)的相互作用蛋白质,并分析其在小鼠耳蜗的表达,探讨CX26在胞内核糖体合成后的运输、装配和在胞膜形成间隙连接的生理过程中可能相关的蛋白质.方法 应用酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质.聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)法扩增正常人GJB2(CX26)全长编码区,基因重组的方法定向克隆于第3代酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7,用构建的诱饵pGBKT7/CX26筛选人胎脑cDNA文库,获得CX26的相互作用蛋白质的初步阳性克隆,再用这些克隆分别与CX26酵母双杂交去除假阳性.对阳性克隆的插入子DNA进行测序、生物信息学分析.用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法分析相互作用蛋白质编码基因的mRNA在小鼠内耳的表达.结果 1个阳性克隆的插入子DNA全长867 bp,前525 bp为编码区.DNA序列及编码读框均与Nogo蛋白的编码基因RTN4的编码区终止密码子前525 bp(包括终止密码子)及终止密码子后非翻译区238 bp完全相同,编码Nogo蛋白的3个异构体Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C的羧基端的174个氨基酸残基.RT-PCR分析示RTN4的mRNA在小鼠内耳表达.结论 Nogo蛋白的羧基端与CX26相互作用,Nogo蛋白在内耳表达.Nogo可能参与了CX26蛋白在内耳细胞的转运或间隙连接功能的生理过程.