带J链的α-防御素-1基因转染COS-7细胞后的表达检测

• 作者: 仝青英 刘贤华 张韶峰 白晓东
• 来源期刊: 中国危重病急救医学
• 学科: 医学
• 关键词: 重组聚合酶链反应 杀菌肽 J链 α-防御素-1 转染
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 71-73
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3492字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-0603.2006.02.003

摘要

目的将α-防御素-1(HNP-1)基因与J链基因重组为一种新的杀菌肽分子JHNP-1,观察J-HNP-1在细胞内的表达及分泌情况.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法分别从pCH-J质粒和pBabeNeo-HNP-1质粒中扩增出J链和HNP-1;进行重组PCR,获取 J-HNP-1 DNA 片段,并插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中;用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入COS-7细胞,然后应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Histag 标签基因.结果用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约24 ku处均有强反应条带显示,其大小与预测相符;对照组未见相应条带显示.结论采用Western blot检测到新的杀菌肽分子J-HNP1在细胞内得到表达并分泌到细胞外,为进一步研究J-HNP1杀菌肽的抗菌活性奠定了基础.