大鼠Neurogenesin-1基因真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的表达

• 作者: 尹宗生 张胜权 张辉 高维陆
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 基因表达 遗传载体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 430-433
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3
• 字数: 3128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.04.006

摘要

目的 克隆大鼠海马中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,构建pSecTag2/Hygro B-Ng1真核表达载体,并检测其在cos-7细胞中的表达,为进一步研究该基因对脊髓神经干细胞分化的影响提供实验依据.方法 在无RNA酶污染的条件下提取出大鼠海马总RNA.利用逆转录聚合酶链反应扩增出Ng1基因片段.将该基因片段连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选,双酶切鉴定后送测序.将构建成功的重组真核表达载体转染入cos-7细胞,Western blot鉴定重组Ng1蛋白的表达. 结果 逆转录聚合酶链反应成功获得大鼠Ng1 cDNA.随机挑选10个重组真核表达载体的克隆,聚合酶链反应筛选出阳性克隆2个,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组质粒构建成功.脂质体介导转染cos-7细胞48 h后,Western blot鉴定重组Ng1蛋白在cos-7细胞中的表达,在46 ku处出现阳性条带. 结论 大鼠海马Ng1基因的真核表达载体pSecTag2/Hygro B-Ng1构建成功,转染cos-7细胞后能够表达重组Ng1蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹宗生	安徽医科大学第一附属医院骨科	142	863	16.0	21.0
2	张辉	安徽医科大学第一附属医院骨科	48	279	9.0	13.0
3	张胜权	安徽医科大学分子生物学教研室	64	295	8.0	14.0
4	高维陆	安徽医科大学第一附属医院骨科	19	97	5.0	9.0