小鼠FABP3基因全长cDNA的克隆、真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

• 作者: 徐力致 李励芸 闻娟 陈慧梅 齐秋锋
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪酸结合蛋白质类 克隆,分子 遗传载体 COS细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 537-540
• 分类号: R349.15
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆小鼠FABP3基因的全长cDNA,构建其真核表达载体,并于COS-7细胞内表达.方法 利用PCR技术扩增小鼠FABP3基因的开放阅读框序列,并在3'末端连接24bp的Flag标签,克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,构建表达质粒pcDNA3.1-FABP3和pcDNA3.1-FABP3-Flag,并行PCR、双酶切及测序鉴定.将构建的重组质粒通过脂质体转染COS-7细胞,分别采用RT-PCR和免疫荧光法检测其FABP3 mRNA及蛋白的表达情况.结果 所构建的pcDNA3.1-FABP3和pcDNA3.1-FABP3-Flag重组载体可酶切出418bp的FABP3 eDNA片段和442bp的FABP3-Flag cDNA片段,经测序证实正确.转染后的COS-7细胞经RT-PCR可扩增出278bp的目的 片段,且免疫荧光分析可见特异性的FABP3及Flag蛋白表达.结论 构建了FABP3基因真核表达载体pcDNA3.1-FABP3和pcDNA3.1-FABP3-Flag,并于COS-7细胞中成功转录表达,为后续研究奠定了基础.